ELISA

(categorie: Analize de laborator)

ELISA este o metodă de laborator care detectează și măsoară o proteină folosind anticorpi legați de o enzimă care produce o reacție de culoare. Numele este acronimul expresiei engleze pentru test imunoenzimatic pe suport solid.

Pentru calprotectina fecală, a fost prima metodă folosită și rămâne cea mai studiată, iar majoritatea pragurilor din literatură provin din determinări prin ELISA.

Cum funcționează

Un anticorp specific este fixat pe fundul unei godeuri. Proba se adaugă, iar proteina căutată se leagă de el. Urmează un al doilea anticorp, cuplat cu o enzimă, care se fixează pe proteina deja captată — construcția în sandviș. În final se adaugă un substrat pe care enzima îl transformă într-un produs colorat.

Intensitatea culorii este proporțională cu cantitatea de proteină și se măsoară cu un fotometru. Concentrația se calculează raportat la o curbă obținută din standarde cu valori cunoscute.

Avantajele și limitele în practică

Precizia

Metoda este robustă, bine validată și cu o variabilitate redusă între determinări în același laborator. De aceea rămâne referința pentru studiile clinice.

Timpul

Se execută de obicei în serii, ceea ce poate prelungi timpul până la rezultat — proba așteaptă până se adună suficiente analize pentru o placă.

Dependența de anticorpi

Anticorpii folosiți de producători diferiți recunosc porțiuni diferite ale complexului S100A8/A9, iar aceeași probă poate da valori diferite pe kituri diferite.

Relevanță clinică

Consecința practică a diversității metodelor este că pragurile orientative din literatură sunt legate de metodele cu care au fost stabilite. Un rezultat se interpretează în raport cu intervalul laboratorului care l-a produs, nu cu o cifră găsită într-un articol.

Consensul internațional publicat în 2021 recunoaște explicit lipsa standardizării și recomandă, pentru monitorizarea aceluiași pacient, folosirea aceleiași metode.

Unde se întâlnește

ELISA este metoda cu cea mai largă aplicabilitate din imunologia de laborator: se folosește pentru hormoni, markeri tumorali, anticorpi din bolile autoimune, serologii infecțioase și alergeni specifici. Când un buletin menționează metoda, denumirea apare adesea ca EIA sau test imunoenzimatic.

Factori care influențează rezultatul

Anticorpii folosiți de kit și porțiunea de proteină pe care o recunosc.

Calibrarea, care nu este raportată la un standard internațional comun pentru calprotectină.

Etapa de extracție din scaun, care precede măsurarea.

Respectarea timpilor de incubare și a temperaturii.

De ce contează

ELISA a fost descrisă în 1971 și a schimbat medicina de laborator prin faptul că a permis măsurarea cantitativă a proteinelor fără radioactivitate, metoda folosită până atunci. Peste cincizeci de ani mai târziu, principiul este neschimbat, iar automatizarea a adăugat viteză fără să înlocuiască logica — un anticorp care prinde, un al doilea care semnalizează.

Concluzie

ELISA măsoară o proteină folosind anticorpi cuplați cu o enzimă care produce o reacție de culoare proporțională cu concentrația. Pentru calprotectina fecală este metoda de referință și sursa majorității pragurilor din literatură. Anticorpii diferiți și lipsa unui standard internațional explică de ce aceeași probă dă valori diferite pe platforme diferite.